调光玻璃墙面的工作原理

大豆种皮是大豆制油的副产品，占整个大豆体积的10%，其中含有约86%的膳食纤维及碳水化合物，8.8%的粗蛋白质，1.2%的粗脂肪及其它微量成分。

3 结果与讨论3.1 UPLC-DAD-BChE在线分析方法的考察流动相中的甲醇和乙腈能降低酶的活性，采用HPLC建立在线检测方法需通过柱后分流降低流动相在酶反应体系的比例，减少对酶活性的影响，此在线联用方式会产生仪器的兼容性等问题，导致在线检测方法稳定性较差。流动相:甲醇(B)-0. 1%甲酸水溶液(A)。

2.3 UPLC-DAD-BChE在线分析方法2.3.1 UPLC色谱条件色谱柱Xtimate UPLC C18色谱柱（2.1 mm 100 mm，1.8 m）。鞘气（N2）和辅助气（Ar）流速分别为40和10 arb. unit。二级质谱采用HCD模式，依赖一级质谱扫描中的1th到5th强峰，分辨率15 000。图2为五个不同浓度莲心碱的UPLC图谱和BChE抑制峰(60，120，600，1 200和 1800 gmL-1)，以活性指纹图谱的倒峰面积为横坐标（X），莲心碱浓度为纵坐标（Y），得到莲心碱的量效曲线方程Y= 351.56X3-1 098.8X2+ 1 473X-32.205 (R = 0.999 7)，表明UPLC-DAD-BCD方法能够用于酶抑制剂的筛选和活性评价。UPLC流速：0.08 mLmin-1。

本研究采用UPLC使流速为0.08 mLmin-1，不分流即可满足在线检测的要求。柱后BChE、DTNB混合溶液和BTCI流速分别为0.30 mLmin-1和0.10 mLmin-1。目前食品和腹泻病人中致泻大肠埃希氏菌的检测越来越受到关注和重视。

实验结果显示，astA、aggR和pic基因得到清晰的扩增条带，说明PCR扩增结果和全基因组测序数据结果准确对应。对于EAECgDNA标准物质，同样具有很好的稳定性。综上所述，EAEC是造成人体中重度腹泻的重要病原菌之一，开展食品中EAEC检测工作对维护人类健康意义重大。相关链接：标准物质，乳粉，微生物声明：本文所用图片、文字来源《食品科学》，版权归原作者所有。

经过25℃、37℃运输稳定性测试，7天仍能保持样品中菌含量在103CFU/样品水平，可以保证样品在非极端的高温天气下运输不受影响，而且在-20℃条件下可以长期储存。考虑到食品基质的复杂性，本研究选用5种不同的食品基质对标准物质进行了验证，结果显示加入标准物质的样品均能检测到EAEC，说明研制的菌体标准物质和gDNA标准物质适用于食品中EAEC的检验，满足质控要求。

目前研究中报道的相关标准物质包括DNA标准物质是以粉末形式冻干，本研究制备的EAEC菌体标准物质和gDNA标准物质均以小球的形式进行冻干，相比较粉末形式冻干，该标准物质使用避免了由于粉末开盖带来的污染和质粒污染，并且省去离心步骤，操作更加方便，同时该标准物质易于溶解，计数更准确。快速准确的检验工作不仅依赖于不同技术的检验方法，还需要科学使用标准物质来保证实验结果的准确性。同时EAECgDNA标准物质特征基因PCR鉴定结果也符合实验要求。本研究制备的EAEC菌体标准物质均匀性良好，经单因素方差分析符合标准物质的要求。

结果表明，研制的标准物质和基因组标准物质适用于食品中肠道集聚性大肠埃希氏菌检验的质控需求。2.6协作验证结果EAEC标准物质通过3家协作验证实验室的标定，测定结果如表7所示，EAEC菌体标准样品菌含量均为103CFU/样品，与研制的目标值一致。在传统的生化方法基础上，利用PCR技术对毒力基因进行扩增，是提高EAEC检出率的有力手段，同时也为标准物质的检验提供了快速准确的方法。如涉及作品内容、版权等问题，请与本网联系删除。

目前，国内针对微生物标准物质的研制已有较大的发展，标准菌株多来自美国菌种保藏中心（ATCC），而且对于标准菌株的鉴定方式多为传统的生化反应。全基因组测序技术在微生物领域研究中发挥着越来越重要的作用。

本研究采用的EAEC标准菌株来源于中国医学细菌保藏管理中心（CMCC），分离自我国腹泻病人，具有我国自主知识产权。而且二代测序数据分析软件的日趋完善，非生物信息学专业人员可以使用网页类型分析工具对微生物基因组测序数据完成微生物遗传特征、溯源等信息分析。

随着测序技术所获得数据量的突破性进展，测序速度和费用得到大幅度改观。目前对于具有我国自主知识产权而且具有清晰全基因组序列信息的标准物质研究还是空白。3讨论和结论准确快速的检测技术是及时有效控制和预防由病原菌引起的食源性疾病的重要手段。2.7标准物质使用效果验证选择熟肉制品、乳粉、腐乳、饼干和薯片5种食品基质共20份样品对EAEC标准物质的使用效果进行验证，检验结果显示，20件样品正常检验（作为本底对照）分离平板上未见可疑菌落，而加入标准物质的样品在分离平板上均有可疑菌落生长，并通过PCR检测扩增得到相应的特征基因条带，与gDNA标准物质扩增条带大小一致。生化和特征基因PCR鉴定结果符合EAEC的特征。该标准物质可用于实验室质量控制及实验室间比对，保证我国食品安全质量检测数据的可靠、可与国际互认。

由于致泻大肠埃希氏菌种类繁多的血清群/型，给检验工作带来很多挑战由表6数据可以看出，-20℃保存60天复苏率为100%，表明-20℃作为标准物质的储藏条件可以满足稳定性要求。

通过与0天时的数据比较计算复苏率，从而评价储藏稳定性。相关链接：标准物质，基因检测，样品声明：本文所用图片、文字来源《食品科学》，版权归原作者所有。

如涉及作品内容、版权等问题，请与本网联系删除。2.5.2储藏稳定性结果将制备的EAEC菌体标准物质于-20℃和4℃保存。

说明-20℃和4℃满足gDNA标准物质的储藏条件。对分别在25℃和37℃条件下存放14天的3个EAECgDNA标准物质样品进行特征性基因检测，PCR产物电泳结果如图3所示，astA、aggR、pic基因均能扩增出清晰的条带。选择4℃保存7、14和28天，-20℃保存28和60天，分别对EAEC菌含量进行检验。4℃条件下，保存14天复苏率为95.6%，28天复苏率为78.2%，样品中菌含量仍保持在103CFU/样品水平，样品仍然稳定，说明4℃可以作为短期储存条件。

上述数据表明，EAEC菌体标准物质和gDNA标准物质在非高温季节，可以常温运输，而在高温季节可以采用泡沫箱加冰袋的方式进行低温运输。计数结果如表5所示，EAEC菌体标准物质在25C条件下保存7天稳定性良好，在37℃环境下5天内稳定情况良好，第7天活菌数量下降出现不稳定现象，但菌含量仍能维持在103CFU/样品水平条件，即满足定性样品的要求。

2.5标准物质的稳定性检测结果2.5.1运输稳定性结果将所制备的EAEC菌体标准物质分别存放于25℃和37℃条件下，于1、3、5、7天各抽取3个样品，通过螺旋涂布进行菌落计数。对分别在-20℃和4℃条件下存放60天的3个EAECgDNA标准物质样品进行特征性基因检测，PCR产物电泳结果如图4所示，EAECgDNA标准物质在-20C和4℃条件下保存60天均能对astA、aggR、pic基因扩增出特异性条带。

说明EAECgDNA标准物质在25C和37℃条件下保存14天稳定性良好说明EAECgDNA标准物质在25C和37℃条件下保存14天稳定性良好。

选择4℃保存7、14和28天，-20℃保存28和60天，分别对EAEC菌含量进行检验。说明-20℃和4℃满足gDNA标准物质的储藏条件。如涉及作品内容、版权等问题，请与本网联系删除。对分别在-20℃和4℃条件下存放60天的3个EAECgDNA标准物质样品进行特征性基因检测，PCR产物电泳结果如图4所示，EAECgDNA标准物质在-20C和4℃条件下保存60天均能对astA、aggR、pic基因扩增出特异性条带。

2.5标准物质的稳定性检测结果2.5.1运输稳定性结果将所制备的EAEC菌体标准物质分别存放于25℃和37℃条件下，于1、3、5、7天各抽取3个样品，通过螺旋涂布进行菌落计数。对分别在25℃和37℃条件下存放14天的3个EAECgDNA标准物质样品进行特征性基因检测，PCR产物电泳结果如图3所示，astA、aggR、pic基因均能扩增出清晰的条带。

计数结果如表5所示，EAEC菌体标准物质在25C条件下保存7天稳定性良好，在37℃环境下5天内稳定情况良好，第7天活菌数量下降出现不稳定现象，但菌含量仍能维持在103CFU/样品水平条件，即满足定性样品的要求。4℃条件下，保存14天复苏率为95.6%，28天复苏率为78.2%，样品中菌含量仍保持在103CFU/样品水平，样品仍然稳定，说明4℃可以作为短期储存条件。

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